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液相色譜柱的選擇、使用

點擊次數(shù):1240 發(fā)布時間:2018-07-30
  液相色譜柱的選擇、使用
  液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。本文重點介紹反相色譜柱的選擇和使用:
  反相色譜柱的選擇
  1.柱子的PH值使用范圍
  反相柱點是固定相穩(wěn)定,應(yīng)用,可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料,使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8,流動相的PH值小于2時,會導(dǎo)致鍵合相的水解;當PH值大于7時硅膠易溶解;經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況,色譜柱人口處會塌陷。同樣填料各種不同牌號的色譜柱不盡相同。
  2.填料的端基封尾(或稱封口)
  把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進行端基封尾,可改善對性化合物的吸附或拖尾;含碳量增了,有利于不易保留化合物的分離;填料穩(wěn)定性好了,組分的保留時間重現(xiàn)性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物,選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。
  液相色譜柱的使用
  色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
  1、樣品的前處理
  a、使用流動相溶解樣品。
  b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
  2、流動相的配制
  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
  b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應(yīng)。
  c、流動相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命(可運用提溫度的方法降低流動相的黏度)。
  d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
  e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進行。
  f、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
  3、流動相流速的選擇
  因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
  當選用*流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈於鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
  注意:
  a.含水流動相在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入*,防止細菌生長。
  b.流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。
  c.使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提柱性能。

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